Studimi i baktereve ka një rëndësi të madhe praktike për njerëzit. Deri më sot, janë zbuluar një numër i madh prokariotësh, të cilët ndryshojnë nga njëri-tjetri për nga patogjeniteti, zona e shpërndarjes, forma, madhësia, numri i flagjelave dhe parametra të tjerë. Për të studiuar këtë lloj në detaje, përdoret një metodë kërkimore bakteriologjike.
Cilat janë metodat për analizimin e qelizave bakteriale?
Për të përcaktuar nëse bakteret janë patogjene, kultura ekzaminohet në mënyra të ndryshme. Midis tyre:
1. Metoda bakterioskopike.
2. Metoda bakteriologjike.
3. Metoda biologjike.
Metodat e kërkimit bakterioskopik dhe bakteriologjik bazohen drejtpërdrejt në punën me qelizat prokariote, kur kërkohet analiza biologjike për të studiuar efektin e qelizave të tilla në organizmin e gjallë të kafshëve eksperimentale. Sipas shkallës së manifestimit të shenjave të caktuara të sëmundjes, shkencëtari mund të bëjëkonkluzioni në lidhje me praninë ose mungesën e baktereve patogjene në kampion, si dhe përhapjen e tyre në mënyrë natyrale në trupin e kafshës për të marrë kulturën e tyre dhe përdorimin në vepra të tjera.
Metoda bakteriologjike e hulumtimit ndryshon nga bakterioskopike. Në të parën përdoret për analizë një kulturë e përgatitur posaçërisht e prokariotëve të gjallë, ndërsa në të dytën punohet me qeliza të vdekura ose të gjalla në një rrëshqitje xhami.
Fazat e metodës së kërkimit bakteriologjik. Mikrobiologjia
Parimi i studimit të vetive të një kulture bakteriale mund të jetë i dobishëm si për mikrobiologët që kanë vendosur qëllimin e studimit të qelizave prokariote, ashtu edhe për teknikët e laboratorit, detyra e të cilëve është të përcaktojnë patogjenitetin ose jopatogjenitetin e baktereve, dhe pastaj diagnostikoni pacientin.
Metoda e studimit të baktereve ndahet në tre faza:
1. Izolimi i baktereve nga kampioni origjinal.
2. Mbjellja e baktereve dhe rritja e një kulture të pastër, studimi i vetive të saj.
3. Studim i detajuar i qelizave bakteriale.
Faza e parë
Mostra, ose njollosja, merret nga sipërfaqja e lirë e mediumit ose nga pacienti. Kështu, ne marrim një "koktej" të shumë llojeve të baktereve që duhet të mbillen në një mjedis ushqyes. Ndonjëherë bëhet e mundur që menjëherë të izolohen bakteret e nevojshme, duke ditur vatrat e tyre të shpërndarjes në trup.
Pas dy ose tre ditësh, zgjidhen kolonitë e dëshiruara dhembillen në media të ngurta të enëve Petri me ndihmën e një laku steril. Shumë laboratorë punojnë me epruveta, të cilat mund të përmbajnë lëndë ushqyese të ngurta ose të lëngshme. Kështu realizohet metoda bakteriologjike e hulumtimit në mikrobiologji.
Faza e dytë
Pas marrjes së kolonive individuale të baktereve, kryhet një makro- dhe mikroanalizë e drejtpërdrejtë. Maten të gjithë parametrat e kolonive, përcaktohet ngjyra dhe forma e secilës prej tyre. Nuk është e pazakontë të numërohen kolonitë në një pjatë Petri dhe më pas në materialin fillestar. Kjo është e rëndësishme në analizën e baktereve patogjene, numri i të cilave varet nga shkalla e sëmundjes.
Metoda bakteriologjike e hulumtimit, faza e dytë e së cilës është studimi i kolonive individuale të mikroorganizmave, mund të shoqërohet me një metodë biologjike për analizimin e baktereve. Një qëllim tjetër i punës në këtë fazë është rritja e sasisë së materialit burimor. Kjo mund të bëhet në një medium ushqyes, ose mund të kryeni një eksperiment in vivo mbi organizmat e gjallë eksperimentalë. Bakteret patogjene do të shumohen, dhe si rezultat, gjaku do të përmbajë miliona qeliza prokariote. Është e lehtë të përgatitet materiali i nevojshëm i punës së baktereve nga gjaku i marrë.
Faza e tretë
Pjesa më e rëndësishme e studimit është përcaktimi i vetive morfologjike, biokimike, toksigjenike dhe antigjenike të kulturës bakteriale. Puna kryhet me kultura të pastruara paraprakisht në një mjedis ushqyes, si dhe me preparate (shpesh të njollosura) nën mikroskop.
Vendos zotëriminbakteret patogjene ose oportuniste ndaj një ose një grupi tjetër sistematik, si dhe për të përcaktuar rezistencën e tyre ndaj barnave, lejon metodën bakteriologjike të hulumtimit. Faza 3 - antibiotikët, pra analiza e sjelljes së qelizave bakteriale në kushtet e përmbajtjes së barnave në mjedis.
Studimi i rezistencës ndaj antibiotikëve të një kulture ka një rëndësi të madhe praktike kur është e nevojshme të përshkruhen barnat e nevojshme, dhe më e rëndësishmja, efektive për një pacient të caktuar. Këtu mund të ndihmojë metoda e kërkimit bakteriologjik.
Çfarë është mediumi i rritjes?
Për zhvillimin dhe riprodhimin, bakteret duhet të jenë në mjedise ushqyese të përgatitura paraprakisht. Sipas konsistencës, ato mund të jenë të lëngshme ose të ngurta, dhe nga origjina - bimore ose shtazore.
Kërkesat bazë për media:
1. Steriliteti.
2. Transparenca maksimale.
3. Treguesit optimalë të aciditetit, presionit osmotik, aktivitetit të ujit dhe vlerave të tjera biologjike.
Marrja e kolonive të izoluara
1. Metoda Drygalsky. Ai konsiston në faktin se një njollë me lloje të ndryshme të mikroorganizmave aplikohet në lakin bakterial. Ky lak kalohet përgjatë pjatës së parë Petri me një lëndë ushqyese. Më tej, pa ndryshuar lakin, metoda e materialit të mbetur kryhet në enët e dytë dhe të tretë Petri. Pra, në mostrat e fundit të kolonisë, bakteret nuk do të mbillen shumë dendur, duke thjeshtuar kështu aftësinë për të gjetur ato të nevojshme për punë.bakteret.
2. Metoda Koch. Ai përdor epruveta me lëndë ushqyese të shkrirë. Një lak ose pipetë me një njollë bakteresh vendoset atje, pas së cilës përmbajtja e epruvetës derdhet në një pjatë të veçantë. Agari (ose xhelatina) ngurtësohet pas ca kohësh dhe është e lehtë të gjesh kolonitë e qelizave të dëshiruara në trashësinë e tij. Është e rëndësishme të hollohet përzierja e baktereve në epruveta përpara fillimit të punës, në mënyrë që përqendrimi i mikroorganizmave të mos jetë shumë i lartë.
Metoda bakteriologjike e hulumtimit, fazat e së cilës bazohen në izolimin e kulturës së dëshiruar të baktereve, nuk mund të bëjë pa këto dy metoda për gjetjen e kolonive të izoluara.
Antibiogram
Vizualisht, reagimi i baktereve ndaj barnave mund të shihet në dy mënyra praktike:
1. Metoda e diskut prej letre.
2. Rritja e baktereve dhe antibiotikut në një mjedis të lëngshëm.
Metoda e diskut të letrës kërkon një kulturë të mikroorganizmave që janë rritur në një mjedis të fortë ushqyes. Në një medium të tillë vendosni disa copa letre të rrumbullakosura të njomura me antibiotikë. Nëse ilaçi përballon me sukses neutralizimin e qelizave bakteriale, pas një trajtimi të tillë do të ketë një zonë pa koloni. Nëse reagimi ndaj antibiotikut është negativ, bakteret do të mbijetojnë.
Në rastin e përdorimit të një mjedisi të lëngshëm ushqyes, fillimisht përgatitni disa provëza me një kulturë bakteresh të hollimeve të ndryshme. Në këto epruveta u shtohen antibiotikë dhe gjatë ditës vërehet procesi i ndërveprimit ndërmjet substancës dhe mikroorganizmave. Si rezultat, merret një antibiogram me cilësi të lartë, sipas të cilit është e mundurgjykoni efektivitetin e barit për një kulturë të caktuar.
Detyrat kryesore të analizës
Këtu rendit qëllimet dhe fazat e metodës bakteriologjike të kërkimit.
1. Merrni materialin fillestar që do të përdoret për të izoluar kolonitë bakteriale. Mund të jetë një njollosje nga sipërfaqja e çdo objekti, mukoze ose zgavër të një organi njerëzor, një test gjaku.
2. Kultivimi i kulturës në një mjedis të ngurtë ushqyes. Pas 24-48 orësh, në pjatën Petri mund të gjenden koloni të llojeve të ndryshme të baktereve. Ne zgjedhim atë të dëshiruar sipas kritereve morfologjike dhe/ose biokimike dhe kryejmë punë të mëtejshme me të.
3. Përhapja e kulturës që rezulton. Metoda e hulumtimit bakteriologjik mund të bazohet në një metodë mekanike ose biologjike të rritjes së numrit të kulturave bakteriale. Në rastin e parë, puna kryhet me lëndë ushqyese të ngurta ose të lëngshme, mbi të cilat bakteret shumohen në një termostat dhe formojnë koloni të reja. Metoda biologjike kërkon kushte natyrore për rritjen e numrit të baktereve, kështu që këtu kafsha eksperimentale infektohet me mikroorganizma. Pas disa ditësh, shumë prokariote mund të gjenden në një mostër gjaku ose njollë.
4. Puna me kulturë të pastruar. Për të përcaktuar pozicionin sistematik të baktereve, si dhe përkatësinë e tyre ndaj patogjenëve, është e nevojshme të kryhet një analizë e plotë e qelizave sipas karakteristikave morfologjike dhe biokimike. Kur studioni grupet patogjene të mikroorganizmave, është e rëndësishme të dinisa efektive janë antibiotikët.
Kjo ishte një karakteristikë e përgjithshme e metodës së kërkimit bakteriologjik.
Veçoritë e analizës
Rregulli kryesor i kërkimit bakteriologjik është steriliteti maksimal. Nëse jeni duke punuar me epruveta, kulturat dhe nënkulturat e baktereve duhet të kryhen vetëm mbi një llambë shpirtërore të ndezur.
Të gjitha fazat e metodës së kërkimit bakteriologjik kërkojnë përdorimin e një unaze të veçantë ose një pipete Pasteur. Të dy mjetet duhet të trajtohen paraprakisht në flakën e një llambë alkooli. Për sa i përket pipetës Pasteur, këtu, para sterilizimit termik, është e nevojshme të thyhet maja e pipetës me piskatore.
Teknika e mbjelljes së baktereve gjithashtu ka karakteristikat e veta. Së pari, kur inokulohet në media të ngurta, një lak bakterial kalon mbi sipërfaqen e agarit. Lak, natyrisht, duhet të ketë tashmë një mostër të mikroorganizmave në sipërfaqe. Praktikohet edhe inokulimi në mjedisin e kulturës, në të cilin rast lathi ose pipeta duhet të arrijnë në fund të enës Petri.
Kur punoni me media të lëngshme, përdoren provëza. Këtu është e rëndësishme të siguroheni që lëngjet të mos prekin skajet e enëve të qelqit ose tapave të laboratorit dhe instrumentet e përdorur (pipeta, lak) të mos prekin objekte dhe sipërfaqe të huaja.
Rëndësia e metodës së kërkimit biologjik
Analiza e mostrës së baktereve ka aplikimet e saj praktike. KryesishtMetoda e hulumtimit bakteriologjik mund të përdoret në mjekësi. Për shembull, është e nevojshme të studiohet mikroflora e pacientit për të vendosur diagnozën e saktë, si dhe për të zhvilluar kursin e duhur të trajtimit. Këtu ndihmon një antibiogram, i cili do të tregojë aktivitetin e barnave kundër patogjenit.
Analiza e baktereve përdoret në laborator për të zbuluar sëmundje të rrezikshme si tuberkulozi, ethet e përsëritura ose gonorreja. Përdoret gjithashtu për të studiuar përbërjen bakteriale të bajameve, zgavrave të organeve.
Metoda e kërkimit bakteriologjik mund të përdoret për të përcaktuar kontaminimin e mjedisit. Sipas të dhënave për përbërjen sasiore dhe cilësore të një njolleje nga sipërfaqja e një objekti, përcaktohet shkalla e popullimit të këtij mjedisi nga mikroorganizmat.
