Diagnoza laboratorike e pothuajse të gjitha sëmundjeve infektive bazohet në zbulimin e antitrupave në gjakun e pacientit, të cilët prodhohen kundër antigjeneve të patogjenit, me metodat e reaksioneve serologjike. Ata hynë në praktikën mjekësore nga fundi i shekullit të nëntëmbëdhjetë deri në fillim të shekullit të njëzetë.
Zhvillimi i shkencës ka ndihmuar në përcaktimin e strukturës antigjenike të mikrobeve dhe formulave kimike të toksinave të tyre. Kjo bëri të mundur krijimin e serumeve jo vetëm terapeutike, por edhe diagnostikuese. Ato merren duke administruar patogjenë të dobësuar te kafshët laboratorike. Pas disa ditësh ekspozimi, gjaku i lepujve ose minjve përdoret për të përgatitur preparate që përdoren për të identifikuar mikrobet ose toksinat e tyre duke përdorur teste serologjike.
Shfaqja e jashtme e një reaksioni të tillë varet nga kushtet e vendosjes së tij dhe nga gjendja e antigjeneve në gjakun e pacientit. Nëse grimcat mikrobike janë të patretshme, ato precipitojnë, lizohen, lidhen ose imobilizohen në serum. Nëse antigjenet janë të tretshëm, atëherë shfaqet fenomeni i neutralizimit ose i precipitimit.
Reaksioni i aglutinimit (RA)
Testi i aglutinimit serologjik është shumë specifik. Është e lehtë për t'u kryer dhe mjaftvizuale, për të përcaktuar shpejt praninë e antigjeneve në serumin e gjakut të pacientit. Përdoret për të testuar reaksionin Vidal (diagnoza e etheve tifoide dhe paratifoide) dhe Weigl (ethet tifoide).
Ai bazohet në një ndërveprim specifik midis antitrupave të njeriut (ose aglutininave) dhe qelizave mikrobike (agglutenogens). Pas bashkëveprimit të tyre, formohen grimca që precipitojnë. Kjo është një shenjë pozitive. Agjentët mikrobikë të gjallë ose të vrarë, kërpudhat, protozoarët, qelizat e gjakut dhe qelizat somatike mund të përdoren për të vendosur reagimin.
Kimikisht, reaksioni ndahet në dy hapa:
- Lidhja specifike e antitrupave (AT) me antigjenet (AG).
- Jospecifike - reshjet e konglomerateve AG-AT, pra formimi i aglutinatit.
Reagimi indirekt i aglutinimit (IPHA)
Ky reagim është më i ndjeshëm se ai i mëparshmi. Përdoret për të diagnostikuar sëmundjet e shkaktuara nga bakteret, parazitët ndërqelizor dhe protozoarët. Është aq specifike saqë mund të zbulohen edhe përqendrime shumë të ulëta të antitrupave.
Për prodhimin e tij përdoren eritrocitet e pastruara të deleve dhe qelizat e kuqe të gjakut të njeriut të para-trajtuara me antitrupa ose antigjene (në varësi të asaj që dëshiron të gjejë tekniku i laboratorit). Në disa raste, qelizat e kuqe të gjakut të njeriut trajtohen me imunoglobulina. Reaksionet serologjike të eritrociteve konsiderohen se kanë ndodhur nëse ato janë vendosur në fund të tubit. Rreth një reagimi pozitivthemi kur qelizat janë të rregulluara në formën e një ombrellë të përmbysur, duke zënë të gjithë fundin. Një reagim negativ llogaritet nëse eritrocitet vendosen në një kolonë ose në formën e një butoni në qendër të pjesës së poshtme.
Reagimi i reshjeve (RP)
Reaksionet serologjike të këtij lloji përdoren për të zbuluar grimcat jashtëzakonisht të vogla të antigjeneve. Këto mund të jenë, për shembull, proteina (ose pjesë të tyre), komponime proteinash me lipide ose karbohidrate, pjesë të baktereve, toksinat e tyre.
Serumet për reaksionin përftohen duke infektuar artificialisht kafshët, zakonisht lepujt. Me këtë metodë, ju mund të merrni absolutisht çdo serum precipitues. Vendosja e reaksioneve serologjike të precipitimit është e ngjashme në mekanizmin e veprimit me reaksionet e aglutinimit. Antitrupat që përmbahen në serum kombinohen me antigjenet në një tretësirë koloidale, duke formuar molekula të mëdha proteinash që depozitohen në fund të tubit ose në substrat (xhel). Kjo metodë konsiderohet shumë specifike dhe mund të zbulojë edhe sasi të papërfillshme të një substance.
Përdoret për të diagnostikuar murtajën, tulareminë, antraksin, meningjitin dhe sëmundje të tjera. Përveç kësaj, ai është përfshirë në një ekzaminim mjekoligjor.
Reagimi i reshjeve të xhelit
Reaksionet serologjike mund të kryhen jo vetëm në një mjedis të lëngshëm, por edhe në xhel agar. Kjo quhet metoda difuze e reshjeve. Me ndihmën e tij studiohet përbërja e përzierjeve komplekse antigjenike. Kjo metodë bazohet në kemotaksën e antigjeneve ndaj antitrupave dhe anasjelltas. Në një xhel lëvizindrejt njëri-tjetrit me shpejtësi të ndryshme dhe, duke u takuar, formojnë linja reshjesh. Çdo rresht është një grup AG-AT.
Reagimi i neutralizimit të ekzotoksinës me antitoksina (PH)
Serumet antitoksike janë në gjendje të neutralizojnë veprimin e ekzotoksinës së prodhuar nga mikroorganizmat. Këto reaksione serologjike bazohen në këtë. Mikrobiologjia e përdor këtë metodë për të titruar serumet, toksinat dhe toksoidet dhe për të përcaktuar aktivitetin e tyre terapeutik. Fuqia e neutralizimit të toksinave përcaktohet nga njësitë konvencionale - AE.
Përveç kësaj, falë këtij reagimi, është e mundur të përcaktohet lloji ose lloji i ekzotoksinës. Kjo përdoret në diagnostikimin e tetanozit, difterisë, botulizmit. Studimi mund të kryhet si "në xhami" dhe në xhel.
Reaksioni i lizës (RL)
Serumi imunitar, i cili hyn në trupin e pacientit, përveç funksionit kryesor të imunitetit pasiv, ka edhe veti lizuese. Është në gjendje të shpërndajë agjentë mikrobikë, elementë të huaj qelizorë dhe viruse që hyjnë në trupin e pacientit. Në varësi të specifikës së antitrupave të përfshirë në serum, izolohen bakterolizinat, citolizinat, spiroketolizinat, hemolizinat dhe të tjera.
Këto antitrupa specifikë quhen "komplement". Ai gjendet pothuajse në të gjitha lëngjet e trupit të njeriut, ka një strukturë komplekse proteinike dhe është jashtëzakonisht i ndjeshëm ndaj rritjes së temperaturës, dridhjeve, acideve dhe rrezet e diellit direkte. Por në gjendje të tharë është në gjendje të mbajëvetitë e tij lizuese deri në gjashtë muaj.
Ka këto lloj reaksionesh serologjike të këtij lloji:
- bakteroliza;
- hemoliza.
Bakterioliza kryhet duke përdorur serumin e gjakut të pacientit dhe serum specifik imunitar me mikrobe të gjalla. Nëse komplementi i mjaftueshëm është i pranishëm në gjak, atëherë studiuesi do të shohë lizën e baktereve dhe reagimi do të konsiderohet pozitiv.
Reagimi i dytë serologjik i gjakut është se një pezullim i qelizave të kuqe të gjakut të pacientit trajtohet me serum që përmban hemolizina, të cilat aktivizohen vetëm në prani të një komplimenti të caktuar. Nëse ka një, atëherë asistenti i laboratorit vëzhgon shpërbërjen e qelizave të kuqe të gjakut. Ky reagim përdoret gjerësisht në mjekësinë moderne për të përcaktuar titrin e komplementit (domethënë sasinë më të vogël të tij që provokon lizën e eritrociteve) në serumin e gjakut dhe për të kryer një analizë për fiksimin e komplementit. Është në këtë mënyrë që kryhet një test serologjik për sifilizin - reagimi Wasserman.
Reagimi i fiksimit të komplementit (CFR)
Ky reaksion përdoret për të zbuluar antitrupat ndaj një agjenti infektiv në serumin e gjakut të pacientit, si dhe për të identifikuar patogjenin sipas strukturës së tij antigjenike.
Deri në këtë pikë, ne kemi përshkruar reaksione të thjeshta serologjike. RSK konsiderohet një reaksion kompleks, pasi jo dy, por tre elementë ndërveprojnë në të: antitrupi, antigjeni dhe komplementi. Thelbi i tij qëndron në faktin se ndërveprimi midis antitrupave dhe antigjenitndodh vetëm në prani të proteinave të komplementit, të cilat absorbohen në sipërfaqen e kompleksit të formuar AG-AT.
Vetë antigjenet, pas shtimit të komplementit, pësojnë ndryshime të rëndësishme, të cilat tregojnë cilësinë e reaksionit. Mund të jetë lizë, hemolizë, imobilizim, veprim baktericid ose bakteriostatik.
Vetë reaksioni ndodh në dy faza:
- Formimi i një kompleksi antigjen-antitrup që nuk është i dukshëm për ekzaminuesin.
- Ndryshim në antigjenin nën veprimin e komplementit. Kjo fazë më së shpeshti mund të gjurmohet me sy të lirë. Nëse reagimi nuk është i dukshëm vizualisht, atëherë përdoret një sistem tregues shtesë për të identifikuar ndryshimet.
Sistemi tregues
Ky reagim bazohet në fiksimin e komplementit. Eritrocitet e dashit të pastruar dhe serumi hemolitik pa komplement shtohen në epruvetë një orë pas vendosjes së RSC. Nëse një komplement i palidhur mbetet në epruvetën, atëherë ai do të bashkohet me kompleksin AG-AT të formuar midis qelizave të gjakut të deleve dhe hemolizinës dhe do të bëjë që ato të shpërndahen. Kjo do të thotë që RSK është negative. Nëse eritrocitet mbeten të paprekura, atëherë, në përputhje me rrethanat, reagimi është pozitiv.
Testi i hemaglutinimit (RGA)
Ekzistojnë dy reaksione thelbësisht të ndryshme të hemaglutinimit. Njëri prej tyre është serologjik, përdoret për të përcaktuar grupet e gjakut. Në këtë rast, qelizat e kuqe të gjakut ndërveprojnë me antitrupat.
Dhe e dytareaksioni nuk vlen për serologjik, pasi qelizat e kuqe të gjakut reagojnë me hemagglutininat e prodhuara nga viruset. Meqenëse çdo patogjen vepron vetëm në eritrocite specifike (pulë, qengji, majmun), ky reagim mund të konsiderohet shumë specifik.
Mund të dalloni nëse një reagim është pozitiv apo negativ nga vendndodhja e qelizave të gjakut në fund të epruvetës. Nëse modeli i tyre ngjan me një ombrellë të përmbysur, atëherë virusi i dëshiruar është i pranishëm në gjakun e pacientit. Dhe nëse të gjitha eritrocitet janë formuar si një kolonë monedhe, atëherë nuk ka patogjenë të dëshiruar.
Testi i frenimit të hemaglutinimit (HITA)
Ky është një reagim shumë specifik që ju lejon të përcaktoni llojin, llojin e viruseve ose praninë e antitrupave specifikë në serumin e gjakut të pacientit.
Thelbi i tij qëndron në faktin se antitrupat e shtuar në provëz me materialin e provës parandalojnë depozitimin e antigjeneve në eritrocite, duke ndaluar kështu hemaglutinimin. Kjo është një shenjë cilësore e pranisë në gjak të antigjeneve specifike për virusin specifik që po kërkohet.
Reaksioni imunofluoreshencës (RIF)
Reagimi bazohet në aftësinë për të zbuluar komplekset AG-AT me mikroskopi fluoreshente pas trajtimit të tyre me ngjyra fluorokrom. Kjo metodë është e lehtë për t'u trajtuar, nuk kërkon izolim të kulturës së pastër dhe kërkon pak kohë. Është i domosdoshëm për diagnostikimin e shpejtë të sëmundjeve infektive.
Në praktikë, këto reaksione serologjike ndahen në dy lloje: direkte dhe indirekte.
RIF direkt është prodhuar ngaantigjen, i cili para-trajtohet me serum fluoreshente. Dhe ajo indirekte është se fillimisht medikamenti trajtohet me një diagnozë konvencionale që përmban antigjene për antitrupat e interesit dhe më pas riaplikohet serumi lumineshent, i cili është specifik për proteinat e kompleksit AG-AT dhe qelizat mikrobike. bëhen të dukshme nën mikroskop.
