Metodë kolorimetrike - një analizë e bazuar në një krahasim të ngopjes së ngjyrave të substancave të studiuara dhe të njohura. Rezultatet e testeve fizike dhe kimike kanë një vlerë të madhe për shumë degë të shkencës, por mbi të gjitha kërkimet përdoren në mjekësi.
Esenca e metodës kolorimetrike
Ka shumë lloje testesh që përcaktojnë përbërjen kimike të substancave. Disa prej tyre janë universale dhe përdoren gjerësisht në fusha të ndryshme, të tjerat janë specifike, me saktësi më të lartë. Metoda kolorimetrike është universale.
Thelbi i analizës qëndron në faktin se ngopja e ngjyrës së një tretësire me një përqendrim të panjohur krahasohet me ngjyrën e një tretësire standarde. Gjatë analizës, si rezultat i bashkëveprimit të përbërësit të hetuar me një reagent të caktuar, formohet një përbërje me ngjyrë. Pas përfundimit të reaksionit, nuanca që rezulton krahasohet me ngjyrën e tretësirave, përqendrimi i të cilave tashmë dihet.
Besohet se themeluesi i kolorimetrisë është Robert Boyle. Ai përdorte shtrydhjetaninet për të dalluar hekurin nga bakri në tretësirë. Ishte Boyle ai që vuri re se sa më i madh përqendrimi i hekurit në tretësirë, aq më i pasur ishte toni i këtij të fundit.
Kolorimetri
Kolorimetria është një metodë për përcaktimin e sasisë së një substance në tretësirë. Analiza bazohet në ligjin Bouguer-Lambert-Beer: kur një rreze drite godet një shtresë të dendur thithëse të një substance, intensiteti i saj dobësohet.
Metoda kolorimetrike për përcaktimin e përqendrimit të një substance mund të përdorë një krahasim vizual ose krahasim duke përdorur instrumente speciale për të matur intensitetin e ngjyrës. Krahasimi bëhet në mënyrë të drejtpërdrejtë dhe kompensuese.
- Drejt. Metoda përfshin krahasimin e nivelit të ngjyrës së tretësirës së provës në një densitet dhe temperaturë të caktuar të lëngut me një zgjidhje referuese. Kur përdorni fotokolorimetra dhe spektrofotometra, uji i distiluar përdoret si zgjidhje referimi. Pajisjet matin intensitetin e rrymës, e cila varet nga intensiteti i dritës.
- kompensues. Metoda bazohet në sjelljen e ngjyrës së kampionit të studiuar në atë referencë. Rezultati arrihet duke shtuar një tretës ose duke rritur lartësinë e shtresës së mediumit të njollosur.
Përdorimi i spektrofotometrit, monokromatorit dhe instrumenteve të tjera precize thjeshton më tej metodën tashmë të thjeshtë të kërkimit dhe ju lejon të rrisni saktësinë e rezultateve. Këto pajisje janë në gjendje të matin sasinë e transmetimit të dritës dhe të përcaktojnë gjatësinë e valës.
Ku aplikohet analiza
Metoda kolorimetrike e analizës përdoret kur dihet përbërja e saktë kimike, ekziston një mostër referencë për krahasim dhe temperatura e provës dhe kampionit të referencës është e njëjtë. Nëse duhet të përcaktoni shpejt sasinë e një lënde me ngjyrë, por ajo është aq e vogël sa është e pamundur të zbatohet metoda analitike.
Kolorimetria përdoret gjerësisht në mjekësi për kërkime klinike biokimike dhe fusha të tjera:
- industri farmaceutike;
- industria e ushqimit dhe alkoolit;
- agronomi (përcaktimi i cilësisë së tokës).
Pro dhe kundër
Metoda kolorimetrike, si çdo tjetër, ka të mirat dhe të këqijat.
Përparësitë përfshijnë sa vijon:
- lehtësia e analizës, procedura minimale përgatitore;
- mundësia e testimit edhe me një sasi të vogël të materialit testues;
- nuk ka nevojë për pajisje të shtrenjta, megjithëse pajisjet moderne që nuk janë të lira janë përdorur gjithnjë e më shumë kohët e fundit. Por ato japin rezultatin më të saktë.
Disavantazhet: saktësi e ulët e analizës në krahasim me metodat analitike.
Metodë biurete për përcaktimin e proteinave
Proteina në serumin e gjakut është një tregues që pasqyron gjendjen e homeostazës. Një rritje në përqendrimin e një përbërjeje makromolekulare në gjak quhet hiperproteinemi, një përmbajtje e ulët quhet hipoproteinemi.
Proteinat nëserumi i gjakut ka një përbërje, strukturë, veti të ndryshme, kryen funksione të ndryshme. Ato ndahen në enzima, hormone, imunoglobulina dhe të tjera. Të gjitha grupet e proteinave kanë një sërë karakteristikash të përbashkëta, në bazë të të cilave janë zhvilluar metoda për përcaktimin e përbërjeve organike makromolekulare në lëngjet biologjike.
Nga të gjitha metodat në biokiminë klinike, metodat kolorimetrike për përcaktimin e proteinave përdoren më shpesh. Ato janë relativisht të lira, gjë që është e rëndësishme për organizatat buxhetore. dhe janë mjaft të thjeshta. Më e zakonshme është metoda biurete. Thelbi i metodës: proteinat në një mjedis alkalik reagojnë me sulfat bakri dhe formojnë komponime të purpurta. Përmbajtja e proteinave në gjak përcaktohet nga ngopja e ngjyrosjes. Biomateriali për analizë merret në mëngjes me stomakun bosh.
Analiza është shumë e saktë, por ka faktorë që ndikojnë në përqendrimin e proteinave në gjak:
- aktiviteti fizik pak para marrjes së mostrave të biomaterialit;
- javët e fundit të shtatzënisë dhe laktacionit;
- përdorimi i barnave Corticotropin, Miscleron, Clofibrate rrit përmbajtjen e proteinave në gjak, dhe përdorimi i Pirazinamidit dhe estrogjenit - për uljen e përqendrimit;
- pozicioni i gabuar i dorës gjatë marrjes së mostrave të biomaterialit.
Përcaktimi i hekurit
Sasia e hekurit në gjak është një nga treguesit kryesorë në diagnostikimin e sëmundjeve të ndryshme. Substanca është e përqendruar në hemoglobinë, e cila siguron transportin e oksigjenit në inde. PërPërcaktimi i hekurit me metodën kolorimetrike, më së shpeshti, si reagjent kryesor përdoret një tretësirë e batofenantrolinës (0.02%). Biomaterial - serum pa gjurmë hemolize.
Thelbi i metodës: ndërveprimi i joneve të hekurit dhe batofenantrolinës së sulfatuar formon një kompleks me ngjyrë, ngopja e të cilit përcaktohet fotometrikisht. Për të marrë një zgjidhje të qartë, është e nevojshme të ndiqen rregullat për marrjen e mostrave të biomaterialit, por për të përcaktuar me saktësi densitetin optik të komplekseve hekur-ligand, hekuri lirohet nga hemoglobina duke përdorur hidroksilaminë dhe detergjentë (natriumi dodecil sulfat). Rezultati i testit përcakton praninë dhe shkallën e patologjisë. Përqendrimi normal i hekurit duhet të jetë:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (meshkuj);
- 10, 6-21, 7 μmol/L (femra).
Mungesa e hekurit zakonisht lidhet me humbjen e gjakut, marrjen e pamjaftueshme dietike ose thithjen e dobët nga trakti gastrointestinal.
Testi i kolesterolit
Kolesteroli është një substancë organike që gjendet në muret qelizore të shumë organizmave, përfshirë njerëzit. Është i nevojshëm për prodhimin e kolekalciferolit dhe hormoneve steroide. Një nivel i kolesterolit prej 3,37-5,2 mmol/L konsiderohet normal. Përmbajtja e ngritur është një nga shkaqet kryesore të aterosklerozës.
Metodat kolorimetrike për përcaktimin e kolesterolit ju lejojnë të njihni sëmundjet vaskulare në një fazë të hershme. Sipas rezultateve patoanatomike në rezultatin vdekjeprurës të ishemisë, përqendrimi i alkoolit lipofilik te pacientëtishte 6,5-7,8 mmol/L.
Parimi i metodës kolorimetrike është se kolesteroli oksidohet nga oksidoreduktaza 3beta-hidroksi-steroide, duke çliruar peroksid hidrogjeni, i cili konverton p-aminoatipirinën në një përbërje me ngjyrë. Përmbajtja e kolesterolit përcaktohet nga ngopja e ngjyrës së tij.
Gjatë kryerjes së një testi tek një fëmijë, duhet pasur parasysh që përqendrimi i kolesterolit në fëmijëri nuk duhet të kalojë 4,1 mmol/l.
Cila është metoda kolorimetrike enzimatike?
Testet enzimatike bazohen në përdorimin e reaksioneve nga enzimat me aktivitet të lartë. Ato përdoren gjerësisht në kiminë analitike për të përcaktuar substanca të ndryshme - nga jonet e nitrateve te makromolekulat.
Metodat enzimatike (enzimatike) janë specifike, duke lejuar analizën e substancave të caktuara në prani të substancave të tjera të ngjashme në përbërje. Metodat më të zakonshme të bazuara në përdorimin e enzimës - oksidaza e glukozës. Testi përdoret për të përcaktuar përqendrimin e glukozës në gjak. Saktësia e testit lejon që ai të përdoret për të rregulluar dozën e agjentëve hipoglikemikë në pacientët me diabet të tipit 2.
Metoda e oksidantit të glukozës konsiderohet si një nga metodat sasiore më të mira për përcaktimin e glukozës. Si biomaterial mund të përdoren si gjaku (kapilar) ashtu edhe serumi, por plazma është më e preferueshme sepse ka një përmbajtje më të ulët hematokriti, gjë që ndikon negativisht në saktësinë e rezultatit.
Përdoret kryesisht metoda kinetike e fotometrisë. Thelbi i saj qëndron në faktin seraporti i vendosur i oksidazës së glukozës dhe peroksidazës, për një kohë të caktuar pas fillimit të reaksionit, shkalla e formimit të një përbërjeje me ngjyrë do të jetë në përpjesëtim me nivelin e glukozës në mostër. Avantazhi kryesor i testit është se rezultati nuk ndikohet nga prania e komponimeve të palëve të treta në mostër. Metoda ka gjithashtu një pengesë - instrumente matëse të shtrenjta nga prodhuesit gjermanë ose suedezë kërkohen për provën.
Përfundim
Metoda kolorimetrike është e saktë dhe e lehtë për t'u përdorur. Përdorimi i tij në mjekësi lejon zbulimin e hershëm të ndryshimeve të ndryshme patologjike në trup. Me futjen e teknologjive të reja, metoda po përmirësohet dhe po bëhet gjithnjë e më popullore.
