Kohët e fundit është zhvilluar një metodë e besueshme, shumë e ndjeshme dhe e shpejtë për diagnostikimin e sëmundjeve të ndryshme infektive njerëzore. Kjo metodë quhet "PCR analizë". Çfarë është, cili është thelbi i tij, çfarë mikroorganizmash mund të zbulojë dhe si ta marrim saktë, do ta tregojmë në artikullin tonë.
Historia e zbulimit
Shpiku metodën e reaksionit zinxhir polimerazë (PCR) nga shkencëtari amerikan Kary Mullis në vitin 1983. Fillimisht, metoda diagnostikuese u patentua nga Korporata Cetus, në të cilën punonte krijuesi i saj. Por në vitin 1992, të gjitha të drejtat dhe patentat iu shitën Hoffman-La Roche. Pas kësaj, rezultoi se studime të ngjashme u kryen paralelisht dhe u regjistruan nga biologë të tjerë amerikanë, si Alice Chen, David Edgar, John Trell. Në vitin 1980, me këtë problem u morën edhe shkencëtarët sovjetikë A. Slyusarenko, A. Kaledin dhe S. Gorodetsky. Prandaj, ishte e pamundur të përcaktohej mbajtësi i vetëm i të drejtës së autorit. Shumë biokimistë të shquar kanë dhënë një kontribut të caktuar në zhvillimin e teknikës së reaksionit zinxhir polimerazë dhe kanë patentuar risitë e tyre. Aktualisht, analizaPCR kryhet kudo në laboratorë të pajisur posaçërisht.
Thelbi i metodës diagnostike PCR
Analiza PCR: çfarë është dhe si funksionon? Thelbi i metodës është rritja e vëllimit të një mjedisi të caktuar mikrobik në kushte artificiale duke përdorur një enzimë speciale të polimerazës së ADN-së. Për këtë, materiali ekzistues i ADN-së shumëfishohet shumë herë. Kështu, në prani të një mikroorganizmi patogjen në kampion, sasia e tij do të rritet për shkak të manipulimeve laboratorike biokimike dhe nuk do të jetë e vështirë të zbulohet bakteri nën mikroskop.
Si bëhet kërkimi material?
Kërkohet për analizë:
- Matrica e ADN-së;
- abetare që lidhin skajet e një pjese materiali;
- enzimë ADN polimerazë rezistente ndaj nxehtësisë;
- kimikate që i bëjnë enzimat të funksionojnë siç duhet;
- zgjidhje tampon e nevojshme për të krijuar kushtet e përshtatshme për rritjen dhe zhvillimin e materialit të ADN-së.
Për të kryer PCR, kryhen 25-30 përsëritje, të përbërë nga tre faza: denatyrim, pjekje dhe zgjatim.
Për analizën e reaksionit zinxhir polimer, përdoret një pajisje speciale - një përforcues. Pajisjet moderne ju lejojnë të vendosni programin e nevojshëm për tubat e ngrohjes dhe ftohjes për të eliminuar gabimet gjatë diagnostikimit.
Ku përdoret diagnostifikimi?
Metoda e reaksionit zinxhir polimer përdoret në fusha të ndryshme të mjekësisë:
- kriminalistët meai identifikon materialin gjenetik si flokët, pështymë ose gjak;
- Testi i gjakut PCR ndihmon me gjenotipizimin, për shembull, për të zbuluar një reagim individual gjenetikisht të qenësishëm ndaj një ilaçi të caktuar;
- duke përdorur këtë metodë për të vendosur praninë e lidhjeve familjare midis njerëzve;
- Metoda më e popullarizuar PCR është bërë në diagnostikimin mjekësor për të përcaktuar sëmundje të ndryshme infektive.
Çfarë infeksionesh zbulon PCR?
Pra, mjekësia ka përdorur prej kohësh dhe me sukses analizën PCR. Çfarë është, ne tashmë e dimë. Dhe çfarë patogjene mund të zbulohen me të? Sëmundjet infektive të mëposhtme diagnostikohen me metodën PCR:
- hepatiti A, B, C;
- ureaplasmosis;
- kandidiaza;
- klamidia;
- mikoplazmozë;
- gardnerellosis;
- mononukleoza infektive;
- trichomoniasis;
- infeksion papillomavirus;
- tuberkulozi;
- infeksion herpes tipat 1 dhe 2;
- helicobacteriosis;
- citomegalovirus;
- difteria;
- salmoneloza;
- infeksion HIV.
Gjithashtu, metodat PCR përdoren në diagnostikimin e kancerit.
Përfitimet e metodës
Diagnostifikimi PCR ka disa përparësi:
- Ndjeshmëri e lartë. Edhe në prani të vetëm disa molekulave të ADN-së së mikroorganizmit, analiza PCR përcakton praninë e infeksionit. Metoda do të ndihmojë me sëmundjet kronike dhe që shfaqen latente. Shpesh në raste të tilla, mikroorganizmiështë ndryshe e pakultivueshme.
- Çdo material është i përshtatshëm për kërkime, si pështyma, gjaku, sekrecionet gjenitale, flokët, qelizat epiteliale. Më e shpeshta është analiza e gjakut dhe njolla urogjenitale për PCR.
- Nuk kërkohet prodhim afatgjatë. Procesi i automatizuar i diagnostikimit ju lejon të merrni rezultatet e studimit pas 4-5 orësh.
- Metoda është pothuajse 100% e besueshme. Janë regjistruar vetëm raste të izoluara të rezultateve të rreme negative.
- Aftësia për të identifikuar disa lloje të patogjenëve nga një mostër e vetme materiale. Kjo jo vetëm që përshpejton procesin e diagnostikimit të sëmundjes, por gjithashtu redukton ndjeshëm kostot materiale. Shpesh mjeku përshkruan një analizë gjithëpërfshirëse PCR. Çmimi i ekzaminimit, i cili konsiston në përcaktimin e gjashtë patogjenëve, është rreth 1500 rubla.
Rekomandime për përgatitjen për analizë
Që rezultatet të jenë të besueshme gjatë studimit PCR, duhet të bëni testin, duke ndjekur rekomandimet për përgatitjen paraprake për diagnozën:
- Para se të dhuroni pështymë, duhet të përmbaheni nga ngrënia dhe marrja e ilaçeve 4 orë para marrjes së mostrës. Menjëherë para procedurës, shpëlajeni gojën me ujë të valuar.
- Rregullat e mësipërme duhet të ndiqen edhe gjatë marrjes së mostrës nga sipërfaqja e brendshme e faqes. Pas shpëlarjes rekomandohet të bëni një masazh të lehtë të lëkurës për të theksuar sekretimin e gjëndrës.
- Urina zakonisht mblidhet në shtëpi. Për ta bërë këtë, ju duhet të bëni një tualet të plotëorganet gjenitale. Mblidhni 50-60 ml urinë në një enë plastike sterile. Për të siguruar pastërtinë e materialit, rekomandohet që femrat të fusin një tampon në vaginë dhe meshkujt të tërheqin palosjen e lëkurës sa më shumë që të jetë e mundur. Mos dhuroni gjatë periodave tuaja.
- Për të dhuruar spermë, duhet të përmbaheni nga marrëdhëniet seksuale për 3 ditë përpara marrjes së mostrës. Mjekët këshillojnë gjithashtu të mos vizitoni saunën dhe të bëni një banjë të nxehtë, të pini alkool dhe ushqime pikante. Duhet të përmbaheni nga urinimi 3 orë para testit.
- Për të marrë një test urogjenital, për shembull, nëse kryhet një test PCR për klamidia, si gratë ashtu edhe burrat këshillohen të bëjnë pushim seksual për 3 ditë. Barnat antibakteriale nuk duhet të merren 2 javë para analizës. Për një javë, ju duhet të ndaloni përdorimin e xheleve intime, pomadave, supozitorëve vaginalë, dushimit. 3 orë para ekzaminimit, duhet të përmbaheni nga urinimi. Gjatë menstruacioneve, mostra nuk bëhet, vetëm 3 ditë pas ndërprerjes së rrjedhjes së gjakut, mund të bëni një test urogjenital.
PCR gjatë shtatzënisë
Gjatë periudhës së pritjes së foshnjës, shumë infeksione seksualisht të transmetueshme janë jashtëzakonisht të rrezikshme për zhvillimin normal të fetusit. SST-të mund të provokojnë vonesë të rritjes intrauterine, abort ose lindje të parakohshme, keqformime kongjenitale të fëmijës. Prandaj, është jashtëzakonisht e rëndësishme t'i nënshtrohet një ekzaminimi PCR në fillim të shtatzënisë. Është e nevojshme të kaloni analizën pas regjistrimit - deri në 12 javë.
Materiali merret nga kanali i qafës së mitrës duke përdorur një furçë speciale. Procedura është pa dhimbje dhe nuk përbën rrezik për fëmijën. Zakonisht gjatë shtatzënisë, bëhet një analizë për klamidia me metodën PCR, si dhe për ureaplasmosis, mykoplazmozë, citomegalovirus, herpes, papillomavirus. Një kompleks i tillë ekzaminimesh quhet PCR-6.
PCR për diagnozën e HIV
Për shkak të faktit se metoda e reaksionit zinxhir polimerazë është shumë e ndjeshme ndaj ndryshimeve në trup dhe kushteve të diagnozës, shumë faktorë mund të ndikojnë në rezultatin. Prandaj, analiza PCR për infeksionin HIV nuk është një metodë e besueshme, efikasiteti i saj është 96-98%. Në 2-4% të rasteve të mbetura, testi jep rezultate false pozitive.
Por në disa situata, diagnostikimi i HIV PCR është i domosdoshëm. Zakonisht u jepet njerëzve me një rezultat false-negativ ELISA. Tregues të tillë tregojnë se një person nuk ka zhvilluar ende antitrupa ndaj virusit dhe ato nuk mund të zbulohen pa një rritje të shumëfishtë të numrit. Kjo është pikërisht ajo që mund të arrihet duke kryer një test gjaku PCR.
Këto diagnostifikime janë të nevojshme edhe për fëmijët e vitit të parë të jetës të lindur nga një nënë HIV-pozitive. Metoda është e vetmja mënyrë për të përcaktuar me besueshmëri statusin e një fëmije.
PCR për diagnostikimin e hepatitit
Metoda e reaksionit zinxhir polimerazë lejon zbulimin e ADN-së së virusit të hepatitit A, B, C shumë kohë përpara formimit të antitrupave ndaj infeksionit ose shfaqjes së simptomave të sëmundjes. Analiza PCR për hepatitin C është veçanërisht efektive, pasi në 85% të rasteve kjo sëmundje është asimptomatike dhe patrajtimi në kohë hyn në fazën kronike.
Zbulimi në kohë i patogjenit do të ndihmojë në shmangien e komplikimeve dhe trajtimit afatgjatë.
Ekzaminim gjithëpërfshirës PCR
Analizë komplekse PCR: çfarë është ajo? Ky është një ekzaminim duke përdorur metodën e reaksionit zinxhir polimerik, i cili përfshin përcaktimin e disa llojeve të infeksioneve në të njëjtën kohë: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes tipat 1 dhe gonorrllomaa2, 1 dhe 2. Mimi i një diagnoze të tillë varion nga 2000 në 3500 rubla. varësisht nga klinika, materialet dhe pajisjet e përdorura, si dhe nga lloji i analizës: cilësore ose sasiore. Çfarë është e nevojshme në rastin tuaj - mjeku do të vendosë. Në disa raste, mjafton vetëm të përcaktohet prania e patogjenit, në të tjerat, për shembull, me infeksionin HIV, një titër sasior luan një rol të rëndësishëm. Kur diagnostikohen të gjithë patogjenët e mësipërm, ekzaminimi quhet "analiza PCR-12".
Transkript i rezultateve të analizës
Deshifrimi i analizës PCR nuk është i vështirë. Ekzistojnë vetëm 2 shkallë të treguesit - "rezultat pozitiv" dhe "rezultat negativ". Kur zbulohet një patogjen, mjekët mund të konfirmojnë praninë e sëmundjes me 99% siguri dhe të fillojnë trajtimin e pacientit. Me një metodë sasiore për përcaktimin e infeksionit, kolona përkatëse do të tregojë treguesin numerik të baktereve të zbuluara. Vetëm një mjek mund të përcaktojë shkallën e sëmundjes dhe të përshkruajë trajtimin e nevojshëm.
Në disa raste, për shembull, gjatë përcaktimit të infeksionit HIV me PCR, me rezultat negativ, bëhet e nevojshme të kryhen ekzaminime shtesë për të konfirmuar treguesit e marrë.
Ku të testoheni?
Ku të bëni një test PCR: në një klinikë publike apo në një laborator privat? Fatkeqësisht, në institucionet mjekësore komunale, pajisjet dhe metodat shpesh janë të vjetruara. Prandaj, është më mirë t'u jepet përparësi laboratorëve privatë me pajisje moderne dhe personel shumë të kualifikuar. Përveç kësaj, në një klinikë private, ju do të merrni rezultate shumë më shpejt.
Në Moskë, shumë laboratorë privatë ofrojnë analiza PCR për infeksione të ndryshme. Për shembull, në klinika të tilla si Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, kryhet analiza PCR. Çmimi i ekzaminimit është nga 200 rubla. për identifikimin e një patogjeni.
Mund të konkludohet se diagnoza e sëmundjeve infektive me PCR në shumicën e rasteve është një mënyrë e shpejtë dhe e besueshme për të zbuluar patogjenin në trup në fazat e hershme të infeksionit. Por megjithatë, në raste të caktuara, ia vlen të zgjidhni metoda të tjera diagnostikuese. Vetëm një specialist mund të përcaktojë nevojën për një studim të tillë. Deshifrimi i analizës PCR kërkon gjithashtu një qasje profesionale. Ndiqni këshillat e mjekut tuaj dhe mos bëni analiza që nuk ju nevojiten.
